生肉是人類腸道致病菌包括沙門氏菌(Salmonella)、彎曲桿菌 (Campylobacter)、小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)、產毒性大腸桿菌(Escherichia coli)O157:H7以及單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等的重要載體, 其他一些食源性致病菌,如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、產氣莢膜梭菌(Clostridium
perfringens)和蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus) 也存在于一些生肉制品中。這些微生物不僅在我國市售產品的抽檢中被發現，也在進口產品的微生物污染調查中被檢出，它們主要是在屠宰、分割、加工、運輸和零售過程中污染的，如果在隨后的儲存、解凍、加工或烹飪等處理過程中處置不當，則會引起食源性疾病而威脅身體健康，在國內國際貿易中，也會由此導致經濟損失。二氧化氯是一(yi)種(zhong)強氧化(hua)型殺菌劑，被廣泛用于食品(pin)加(jia)工(gong)業的(de)環境、器具等的(de)消毒，觀察(cha)二氧化(hua)氯(lv)對這些食源性致病(bing)菌的(de)殺滅效果具有現實(shi)意(yi)義，可對屠宰廠(chang)或肉制品(pin)加(jia)工(gong)廠(chang)的(de)消毒提供指導。
1 材料和方法
1.1 試驗菌株
采用從全國市場采樣分離得到并經過鑒定、保存的菌株。具體為：小腸結腸炎耶爾森氏菌(FSCC234150; 凍雞翅)、沙門氏菌(FSCC21501418; 雞肉)、金黃色葡萄球菌(FSCC 22301357; 雞肉)、單核細胞增生李斯特氏菌(FSCC 17802589; 凍雞翅)、蠟樣芽孢桿菌 (FSCC 11502697; 豬肉)。試驗菌株制備成相應的菌懸液或芽孢懸液備用。
1.2 消毒劑
試驗采用
二氧化氯消毒液，按產品說明書活化后，用無菌標準硬水稀釋成試驗濃度的 1.25 倍濃度，采用二氧化氯比色計測定濃度
(濃度范圍控制在±1mg/L)。
1.3 試劑
1.3.1有機干擾物
牛血清白蛋白，3%；溶解后用微孔濾膜(孔徑為0.45μm)過濾除菌，冰箱保存備用。
1.3.2 標準硬水 (硬度342mg/L)
氯化鈣(CaCl?), 0.034g; 氯化鎂(MgCl?·6H?O), 0.139g; 蒸餾水加至 1 000 mL。分裝后121℃, 15min高壓滅菌備用。
1.3.3 稀釋液 (胰蛋白胨生理鹽水溶液, TPS)
胰蛋白胨, 100g; 氯化鈉, 8.5g; 蒸餾水加至1000mL, 分裝后121℃, 15min高壓滅菌備用。
1.3.4中和劑
硫代硫酸鈉, 0.2%; 卵黃卵磷脂, 0.3%; 吐溫80, 1.0%的PBS 溶液 (無水磷酸氫二鈉, 2.83g, 磷酸二氫鉀, 1.36g, 蒸餾水加至1000mL)。121℃, 15min高壓滅菌備用。
1.4 中和劑鑒定
中和劑鑒定按照消毒技術規范(2002年版)[4]中2.1.1.5的要求進行，以確定所選的中和劑是否適用于擬進行的懸液定量殺菌試驗。
1.5 懸液定量殺菌試驗
采用懸液定量殺菌試驗評價
二氧化氯對試驗菌株的殺滅效果，方法按照消毒技術規范(2002 年版) [4]中
2.1.1.7.4的要求進行。
2 結(jie)果(guo)與(yu)分析(xi)
2.1 中和劑鑒定結果
以小腸結腸炎耶爾森氏菌為對象的中和劑鑒定試驗結果表明，中和劑、消毒劑和中和劑的中和產物對試驗菌沒有抑菌作用，且中和劑能有效中和最高殺菌試驗濃度，中和劑和中和產物對試驗菌和培養基無影響。由此判定，0.2%硫代硫酸鈉，0.3%卵黃卵磷脂和1.0%吐溫80的PBS溶液可以作為本試驗的中和劑使用。
2.2 對細菌繁殖體的懸液定量殺菌試驗結果
二氧化氯對4種細菌繁殖體的殺滅效果如表1所示。濃度為8mg/L 的二氧化氯作用1min 對 4 種細菌繁殖體的作用效果均有限，懸液定量殺菌試驗的殺滅對數值均<3。從試驗的作用時間來看，在低濃度下，延長時間并不能增加殺滅效果，殺滅對數值在同一水平線上。
單核細胞增生李斯特氏菌似乎表現出比其他3 種細菌繁殖體更強的二氧化氯抵抗性。濃度為 16 mg/L 的二氧化氯對其殺滅對數值仍<4，而對其他3種細菌繁殖體的殺滅對數值均>5。單核細胞增生李斯特氏菌對消毒劑的耐受性較強，它對季銨鹽類消毒劑的耐受性可能與其外排泵相關，但對二
氧化氯的耐受性機制尚未見有關報道。
2.3 對芽孢的懸液定量殺菌試驗結果
二氧化氯對蠟樣芽孢桿菌芽孢懸液的殺滅效果如表2所示。從表中可以看出，芽孢表現出對消毒劑更強的抵抗力，在沒有有機干擾物存在的情況下，所有實驗濃度和作用時間條件下，殺滅對數值均<5。
隨著作用時間的延長，同一試驗濃度對芽孢的殺滅對數值明顯變大 (不同的數量級)，這與表1在低濃度情況下的數據有所不同。這可能是由于添加有機干擾物后，
二氧化氯優先與干擾物反應。
3 討論
試驗表明，二氧化氯對小腸結腸炎耶爾森氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、單核細胞增生李斯特氏菌、蠟樣芽孢桿菌等五種食源性致病菌均具有較好的殺滅效果。對于肉制品屠宰、分割、加工等場所，在使用二氧化氯消毒前應進行徹底的清洗，以盡可能減少脂肪和蛋白質等有機物降低消毒劑的消毒效果。
單核細胞增生李斯特氏菌在本次試驗中表現出不一樣的對二氧化氯的耐受性。它廣泛存在于自然界中，在 4℃的環境中仍可生長繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一。由于肉制品的李斯特氏菌污染而引起的食源性疾病時有暴發。本次試驗揭示，如果在食品加工環境中檢出單核細胞增生李斯特氏菌，在使用
二氧化氯消毒時，較其他目標菌，需相應提高消毒液濃度和延長作用時間，以保證殺滅效果。尤其是李斯特氏菌適合在濕冷的環境生存，在這些環境中使用消毒劑更應注意控制較高的濃度。另外，李斯特氏菌對二氧化氯耐受性的作用機理也值得深入研究。
