久久精品人人做人人爽电影-国产又色又爽又刺激在线观看-97无码精品人妻一区二区老司机-国产精品99久久免费黑人黑人

【目的】研究 ClO?處(chu)理(li)對厚(hou)皮甜瓜果實(shi)采后(hou)愈(yu)傷的影響為厚(hou)皮甜瓜的采后(hou)愈(yu)傷提供方法和理(li)論依據。

【方法(fa)】以(yi)‘瑪瑙’厚(hou)皮甜瓜(gua)為試材(cai)，人工(gong)模(mo)擬損(sun)傷(shang)(shang)后，用25 mg/L的ClO?浸(jin)泡(pao)損(sun)傷(shang)(shang)果(guo)實 10min，于常溫黑暗條(tiao)件下進行愈傷(shang)(shang)。測定(ding)愈傷(shang)(shang)期(qi)間損(sun)傷(shang)(shang)果(guo)實的失(shi)重率以(yi)及損(sun)傷(shang)(shang)接種(zhong)粉紅(hong)單端孢果(guo)實的病情指數，通過(guo)甲苯胺藍和(he)(he)間苯三酚(fen)(fen)—鹽酸染(ran)色(se)法(fa)觀察聚酚(fen)(fen)軟木(mu)脂(zhi)、聚酯軟木(mu)脂(zhi)和(he)(he)木(mu)質素在傷(shang)(shang)口部(bu)位的積(ji)累，并用 IS Capture 圖像軟件對聚酚(fen)(fen)軟木(mu)脂(zhi)、聚酯軟木(mu)脂(zhi)和(he)(he)木(mu)質素積(ji)累量進行分析(xi)。測定(ding)傷(shang)(shang)口表面的色(se)度值(zhi)，分析(xi)傷(shang)(shang)口處組織愈傷(shang)(shang)期(qi)間苯丙烷(wan)代謝(xie)活(huo)性以(yi)及過(guo)氧(yang)化物酶和(he)(he)多酚(fen)(fen)氧(yang)化酶的活(huo)性變化。

【結果】ClO?處(chu)理(li)顯(xian)著(zhu)降低(di)了(le)損傷(shang)(shang)(shang)(shang)果(guo)實(shi)的(de)失(shi)重率和(he)(he)(he)損傷(shang)(shang)(shang)(shang)接種(zhong)果(guo)實(shi)的(de)病情(qing)指(zhi)數(shu)(shu)，愈傷(shang)(shang)(shang)(shang)第(di)7天(tian)(tian)時(shi)(shi)(shi)，處(chu)理(li)比(bi)對照(zhao)低(di)10.3%。果(guo)實(shi)在損傷(shang)(shang)(shang)(shang)后不同時(shi)(shi)(shi)間段接種(zhong)粉紅單端孢，經1周培養觀察，處(chu)理(li)果(guo)實(shi)的(de)病情(qing)指(zhi)數(shu)(shu)顯(xian)著(zhu)低(di)于(yu)對照(zhao)，第(di)7 天(tian)(tian)時(shi)(shi)(shi)處(chu)理(li)果(guo)實(shi)的(de)病情(qing)指(zhi)數(shu)(shu)比(bi)對照(zhao)低(di) 56.9%。處(chu)理(li)顯(xian)著(zhu)促進了(le)果(guo)實(shi)傷(shang)(shang)(shang)(shang)口(kou)(kou)處(chu)聚酚(fen)軟木(mu)脂(zhi)、聚酯軟木(mu)脂(zhi)和(he)(he)(he)木(mu)質(zhi)素(su)的(de)積(ji)累，處(chu)理(li)果(guo)實(shi)的(de)積(ji)累量在愈傷(shang)(shang)(shang)(shang)的(de)中(zhong)后期顯(xian)著(zhu)高(gao)(gao)于(yu)對照(zhao)，三(san)者比(bi)對照(zhao)分(fen)別高(gao)(gao)25.3%、77.7%和(he)(he)(he)35.5%。愈傷(shang)(shang)(shang)(shang)期間，處(chu)理(li)果(guo)實(shi)傷(shang)(shang)(shang)(shang)口(kou)(kou)處(chu)的(de)L*值顯(xian)著(zhu)低(di)于(yu)對照(zhao)，b*值顯(xian)著(zhu)高(gao)(gao)于(yu)對照(zhao)，在愈傷(shang)(shang)(shang)(shang)第(di)5 天(tian)(tian)時(shi)(shi)(shi)，處(chu)理(li)果(guo)實(shi)的(de)L*值比(bi)對照(zhao)低(di)6.1%，第(di)3天(tian)(tian)時(shi)(shi)(shi)的(de)b*值比(bi)對照(zhao)高(gao)(gao)17.8%。處(chu)理(li)明顯(xian)提高(gao)(gao)了(le)果(guo)實(shi)傷(shang)(shang)(shang)(shang)口(kou)(kou)處(chu)的(de)苯(ben)丙(bing)氨(an)酸解(jie)氨(an)酶、過氧(yang)(yang)(yang)化(hua)物酶和(he)(he)(he)多酚(fen)氧(yang)(yang)(yang)化(hua)酶活性，在愈傷(shang)(shang)(shang)(shang)第(di)7天(tian)(tian)時(shi)(shi)(shi)，處(chu)理(li)果(guo)實(shi)傷(shang)(shang)(shang)(shang)口(kou)(kou)處(chu)的(de)苯(ben)丙(bing)氨(an)酸解(jie)氨(an)酶、過氧(yang)(yang)(yang)化(hua)物酶和(he)(he)(he)多酚(fen)氧(yang)(yang)(yang)化(hua)酶活性分(fen)別高(gao)(gao)于(yu)對照(zhao) 34.3%、80.5%和(he)(he)(he) 15.7%。此(ci)外，處(chu)理(li)果(guo)實(shi)傷(shang)(shang)(shang)(shang)口(kou)(kou)處(chu)的(de)總酚(fen)、類(lei)黃(huang)酮和(he)(he)(he)木(mu)質(zhi)素(su)含量也顯(xian)著(zhu)高(gao)(gao)于(yu)對照(zhao)，第(di)7天(tian)(tian)時(shi)(shi)(shi)，分(fen)別高(gao)(gao)于(yu)對照(zhao)14.7%、16.8%和(he)(he)(he) 15.6%。

【結論】ClO?處(chu)理(li)可有效促(cu)進厚皮甜(tian)瓜果實的(de)采后愈傷(shang)，ClO?對愈傷(shang)的(de)促(cu)進作(zuo)用與激活(huo)(huo)傷(shang)口處(chu)的(de)苯(ben)丙烷代謝，提高POD和PPO活(huo)(huo)性，促(cu)進軟木(mu)脂和木(mu)質素的(de)積(ji)累密(mi)切(qie)相關(guan)。

       【研究(jiu)意義】厚皮(pi)甜(tian)瓜(Cucumis melonL.) 是我國西(xi)北地區(qu)特色水果(guo)(guo)，由于果(guo)(guo)實個體(ti)較大(da)，在(zai)采(cai)(cai)收(shou)和采(cai)(cai)后(hou)(hou)過程中易(yi)受機(ji)械損傷(shang)(shang)(shang)，機(ji)械損傷(shang)(shang)(shang)造成的(de)(de)(de)(de)表(biao)(biao)面傷(shang)(shang)(shang)口為病(bing)(bing)(bing)原(yuan)物(wu)的(de)(de)(de)(de)侵(qin)染提供了通道，加劇了采(cai)(cai)后(hou)(hou)腐(fu)爛(lan)(lan)的(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)生。因此(ci)，有(you)(you)效降(jiang)低傷(shang)(shang)(shang)口性(xing)病(bing)(bing)(bing)原(yuan)菌的(de)(de)(de)(de)侵(qin)染率是采(cai)(cai)后(hou)(hou)厚皮(pi)甜(tian)瓜亟待解決的(de)(de)(de)(de)問題。前人研究(jiu)進(jin)展不(bu)同(tong)果(guo)(guo)實表(biao)(biao)面形成的(de)(de)(de)(de)傷(shang)(shang)(shang)口具有(you)(you)不(bu)同(tong)程度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)愈(yu)(yu)合(he)能力(li)，通過在(zai)傷(shang)(shang)(shang)口部位積累(lei)軟木脂和木質素等具有(you)(you)保護作用(yong)的(de)(de)(de)(de)天然聚合(he)物(wu)，從而抑制(zhi)傷(shang)(shang)(shang)口部位水分(fen)的(de)(de)(de)(de)大(da)量(liang)蒸騰，阻止(zhi)病(bing)(bing)(bing)原(yuan)物(wu)經由傷(shang)(shang)(shang)口的(de)(de)(de)(de)侵(qin)入。近期研究(jiu)發(fa)(fa)現，某(mou)些化學藥物(wu)還具有(you)(you)促進(jin)傷(shang)(shang)(shang)口愈(yu)(yu)合(he)的(de)(de)(de)(de)作用(yong)。例如(ru)，苯(ben)丙噻重氮可(ke)(ke)(ke)以促進(jin)采(cai)(cai)后(hou)(hou)梨(li)果(guo)(guo)實的(de)(de)(de)(de)愈(yu)(yu)傷(shang)(shang)(shang)，脫落酸能提高采(cai)(cai)后(hou)(hou)番(fan)茄(qie)和獼猴桃果(guo)(guo)實的(de)(de)(de)(de)愈(yu)(yu)傷(shang)(shang)(shang)能力(li)。ClO?可(ke)(ke)(ke)殺滅(mie)病(bing)(bing)(bing)原(yuan)物(wu)，對(dui)果(guo)(guo)蔬風味和品質無明(ming)顯影響。有(you)(you)報道表(biao)(biao)明(ming)，ClO?處理可(ke)(ke)(ke)減(jian)(jian)(jian)輕龍眼(yan)和番(fan)茄(qie)果(guo)(guo)實的(de)(de)(de)(de)采(cai)(cai)后(hou)(hou)病(bing)(bing)(bing)害(hai)，延緩蘋果(guo)(guo)成熟衰老，減(jian)(jian)(jian)輕采(cai)(cai)后(hou)(hou)腐(fu)爛(lan)(lan)。還可(ke)(ke)(ke)一定程度(du)(du)上(shang)抑制(zhi)鮮切哈密瓜的(de)(de)(de)(de)后(hou)(hou)熟。而 ClO?在(zai)減(jian)(jian)(jian)輕采(cai)(cai)后(hou)(hou)病(bing)(bing)(bing)害(hai)中的(de)(de)(de)(de)作用(yong)與(yu)增強果(guo)(guo)實苯(ben)丙烷代(dai)謝和提高氧化酶活性(xing)密切相關。

【本研究切入點】雖然已有 ClO?誘導采后果實抗病性的報道，但該化合物是否影響厚皮甜瓜果實采后愈傷尚未見報道。擬解決的關鍵問題本研究以“瑪瑙”厚皮甜瓜果實為試材，用 ClO?處理人工損傷的果實后在常溫條件下進行愈傷，測定愈傷期間損傷果實的失重率以及接種果實的病情指數，觀察愈傷組織的色度以及聚酚軟木脂、聚酯軟木脂和木質素的積累變化。分析氧化酶和苯丙烷代謝關鍵酶活性及其代謝產物的含量。評價 ClO?處理對(dui)厚皮(pi)(pi)甜瓜(gua)果實采后愈傷能力的影(ying)響，為ClO?處理在厚皮(pi)(pi)甜瓜(gua)的采后應用(yong)提供(gong)方法和理論依(yi)據。

1 材料與方法

1.1 材料與設(she)備(bei)

供試(shi)‘瑪(ma)瑙’甜瓜于2017年7月采自(zi)甘肅省民勤縣收成(cheng)鄉(xiang)露地大田，選取八成(cheng)熟、外(wai)觀(guan)整齊、大小(xiao)一致、無病蟲傷和(he)機械傷的(de)果(guo)實，單果(guo)套網套后裝入瓦楞紙(zhi)包裝箱，于當天運抵本實驗室, 在(zai)常溫下 (20~25℃, RH70-80%) 貯藏待用。

粉紅單端孢(Trichothecium roseum) 為(wei)甘肅厚皮(pi)甜瓜產區最(zui)常見的(de)采后(hou)病原(yuan)真(zhen)菌(jun),由本實驗室提供，于(yu)PDA培養基上保存待用。

ClO?有效(xiao)濃度120mg/g，于4℃冰箱保存(cun)。

刮皮(pi)刀；恒(heng)溫培養(yang)箱; 超凈工作臺；立式(shi)壓力蒸(zheng)汽滅菌鍋; 正置萬能顯微鏡;Ci6x分光(guang)光(guang)度儀； 臺式(shi)高(gao)速冷凍離心機; 紫外-可(ke)見光(guang)分光(guang)光(guang)度計。

1.2 方法

1.2.1 果實(shi)人工(gong)損傷及愈傷

參照姜紅等(deng)的方法并(bing)進(jin)行修改。果(guo)實先用(yong)(yong)(yong)清水(shui)沖洗(xi)，然(ran)后(hou)用(yong)(yong)(yong)1%的次(ci)氯酸鈉浸(jin)(jin)(jin)泡1min 進(jin)行表面消(xiao)毒，再(zai)用(yong)(yong)(yong)無菌水(shui)沖洗(xi)，晾干后(hou)用(yong)(yong)(yong)刮皮刀(dao)在(zai)果(guo)實的赤道部位分(fen)別刮出(chu)4條(tiao)長30mm、寬30 mm、深(shen)2mm 的傷口。在(zai)室溫條(tiao)件下暴露0.5 h后(hou),將(jiang)損傷的果(guo)實浸(jin)(jin)(jin)入25 mg/L的ClO?浸(jin)(jin)(jin)泡10min,取出(chu)晾干后(hou)分(fen)別裝入打孔的聚乙烯保鮮袋(dai)(25cm×40cm,厚度0.02mm),于(yu)常溫、避光(guang)條(tiao)件下進(jin)行愈(yu)傷，以清水(shui)處(chu)理(li)作對照。每處(chu)理(li)用(yong)(yong)(yong)果(guo)實120個，重復(fu)3次(ci)。

1.2.2 愈傷(shang)效(xiao)果的(de)評價

1.2.2.1 失重率及病情指數的(de)測(ce)定

失重(zhong)率的測定采用重(zhong)量法。每處理用果實9個，重(zhong)復(fu)3次。

病(bing)(bing)情指(zhi)數(shu)的(de)(de)(de)測定參照(zhao)姜紅等的(de)(de)(de)方(fang)法并修改。在培養(yang)了1 周的(de)(de)(de)T.roseum培養(yang)皿(min)中加(jia)入一定量的(de)(de)(de)無(wu)菌水，用(yong)涂(tu)布器刮下(xia)孢(bao)(bao)子用(yong)4層(ceng)紗布過濾至錐形瓶中，在振蕩器上振蕩15 s，經過血球計數(shu)板計數(shu)配置(zhi)成濃(nong)度為(wei) 1×10?個/mL 的(de)(de)(de)孢(bao)(bao)子懸浮液。分別(bie)在果實損(sun)傷(shang)后的(de)(de)(de)第0、1、3、5、7天，用(yong)涂(tu)布器將(jiang)20μL配好的(de)(de)(de)孢(bao)(bao)子懸浮液均勻涂(tu)于創(chuang)(chuang)口(kou)(kou)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)，晾干后裝入打(da)孔的(de)(de)(de)聚(ju)乙烯保(bao)鮮袋中，常溫培養(yang)7天后統計病(bing)(bing)情指(zhi)數(shu)。每個處理用(yong)果實8個，重復(fu)3次。病(bing)(bing)情指(zhi)數(shu)- ∑(高痔物口(kou)(kou)傷(shang)口(kou)(kou)個數(shu)x態減病(bing)(bing)吸別(bie))×100式中，發病(bing)(bing)級(ji)別(bie)的(de)(de)(de)標準為(wei)：4級(ji)，創(chuang)(chuang)口(kou)(kou)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)全部發病(bing)(bing)；3級(ji)，創(chuang)(chuang)口(kou)(kou)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian) 3/4 的(de)(de)(de)面(mian)(mian)(mian)積發病(bing)(bing)；2級(ji)，創(chuang)(chuang)口(kou)(kou)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)1/2面(mian)(mian)(mian)積發病(bing)(bing)；1級(ji)，創(chuang)(chuang)口(kou)(kou)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian) 1/4 面(mian)(mian)(mian)積發病(bing)(bing)；0級(ji)，創(chuang)(chuang)口(kou)(kou)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)不發病(bing)(bing)。

1.2.2.2 聚(ju)酚軟(ruan)木脂、聚(ju)酯(zhi)軟(ruan)木脂和(he)木質素沉積(ji)的(de)觀察

聚(ju)酚軟(ruan)木脂(suberin poly phenolic, SPP) 和聚(ju)酯軟(ruan)木脂(suberin poly aliphatic,SPA)的(de)沉積觀察(cha)(cha)參(can)照ILulai的(de)方法(fa)并修(xiu)改(gai)。用(yong)不銹鋼刀(dao)片垂直傷口表面切成厚(hou)0.2~0.3 mm，長和寬各為(wei)1 cm左右的(de)薄片。采用(yong)如下(xia)步驟進行(xing)染色：用(yong)0.1%小檗堿(0.05%甲(jia)苯胺藍(lan)(lan))染色45 min后(hou), 先吸去染料(liao), 再用(yong)蒸(zheng)餾水和 75%酒精(jing)(jing)洗2~3 遍, 最后(hou)用(yong) 95%酒精(jing)(jing)洗 1~2遍，即(ji)脫去染料(liao)，緊接著在0.25%甲(jia)苯胺藍(lan)(lan)(1%中性紅)中放置1~2m in進行(xing)復(fu)染，最后(hou)用(yong)蒸(zheng)餾水和 75%酒精(jing)(jing)洗去染料(liao)，SPP(SPA)即(ji)染為(wei)紫(zi)藍(lan)(lan)色。將染好色的(de)薄片置于載玻片上，在顯微鏡下(xia)熒光(guang)觀察(cha)(cha)拍照。每個果(guo)實切片4處，重復(fu)3次。

木質素的沉(chen)積觀察參照ALBA 等的方法并修改(gai)。用不銹(xiu)鋼刀片垂(chui)直(zhi)傷口表面切(qie)成厚0.2~0.3mm,長和寬(kuan)各為(wei)1cm左右(you)的薄片, 滴(di)加1%間苯三酚染(ran)色1.5min后再加1~2滴(di)濃鹽酸，木質素即染(ran)為(wei)紅色，置于顯(xian)微鏡下觀察拍照。每個果實切(qie)片4處，重復3次。

愈(yu)傷(shang)組(zu)織的(de)SPP、SPA 和木質化細胞層的(de)厚度根據文獻的(de)方(fang)法(fa)通過IS Capture 圖像軟件進(jin)行測量計算。

1.2.3 愈傷組織色度(du)的測定

在愈傷(shang)的0、1、3、5、7 d用Ci6x 分光(guang)光(guang)度(du)儀垂直于(yu)愈傷(shang)組織表(biao)面進行色度(du)的測(ce)定(ding)，依次測(ce)定(ding) L*、a*和b*值，每個(ge)處理測(ce) 12處愈傷(shang)組織。

1.2.4 生化測定取樣

參照BI等(deng)的方法。在愈傷的0、1、3、5、7d，用(yong)不銹鋼刀片垂直傷口表面下取2~3mm深的傷口組織(zhi)3g，用(yong)錫(xi)箔紙包好后(hou)用(yong)液氮冷凍，在-80℃超低溫冰(bing)箱中保存(cun)備用(yong)。

1.2.5 苯丙氨酸(suan)解(jie)氨酶(mei)、過氧化(hua)物(wu)酶(mei)和(he)多酚氧化(hua)酶(mei)的活性測定

苯丙氨(an)酸(suan)解氨(an)酶(mei)(mei)(phenylalnine ammonialyase,PAL)的測(ce)定參(can)照 Liu等的方法并修改。取冷凍樣品3g, 于5mL 硼(peng)酸(suan)-硼(peng)砂(sha)緩沖液(ye)(pH8.8, 含40g/L 聚乙(yi)烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone, PVP), 2 mmol·L?1乙(yi)二胺四乙(yi)酸(suan) (ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA) 和5 mmol·L?1β-巰基乙(yi)醇) 中(zhong)(zhong)冰浴(yu)研(yan)磨成漿(jiang), 在4℃、12 000×g條件下離(li)心30 min, 上層酶(mei)(mei)液(ye)即為(wei)粗酶(mei)(mei)液(ye)。反應(ying)體系包括: 0.1mL 粗酶(mei)(mei)液(ye), 3mL 硼(peng)酸(suan)-硼(peng)砂(sha)緩沖溶液(ye)液(ye) (50mmol/L,pH8.8), 0.5mL食物(wu)L-苯丙氨(an)酸(suan)(20mmol/L), 以蒸餾水(shui)為(wei)參(can)比, 測(ce)定反應(ying)體系混合10s 后(hou)在290 nm波長處(chu)的吸光值(zhi)(zhi)作(zuo)為(wei)初始(shi)值(zhi)(zhi)(OD?)，將(jiang)混合液(ye)在37℃水(shui)浴(yu)鍋中(zhong)(zhong)保溫1 h后(hou)在 290 nm波長處(chu)的吸光值(zhi)(zhi)作(zuo)為(wei)終止值(zhi)(zhi)(OD?)。以每小時(shi)吸光值(zhi)(zhi)變(bian)化(hua)值(zhi)(zhi)增加(jia)0.01 為(wei)一個(ge)酶(mei)(mei)活性(xing)單位 (U), 以U/g FW表(biao)示。

過氧化(hua)物酶(mei)(mei)(mei)(mei)(peroxidase,POD) 和(he)多酚氧化(hua)酶(mei)(mei)(mei)(mei)(polyphenol oxidase, PPO) 的測定(ding)參照Li的方法(fa)。取(qu)冷凍樣品3g, 于5mL 乙酸-乙酸鈉(na)緩沖液(ye)((pH5.5, 含 1mmol/L 聚乙二(er)醇(polyethylene glycol, PEG),4%交聯聚乙烯吡咯(ge)烷酮(crosslinking polyvingypyrrolidone,PVPP) 和(he)1%聚乙二(er)醇辛基(ji)苯(ben)基(ji)醚(Triton X-100)) 中研磨成漿, 在4℃、12 000×g條件下離心 30min, 收集上層液(ye)用即(ji)為(wei)粗酶(mei)(mei)(mei)(mei)液(ye)。POD反應(ying)體系: 3mL25mmol/L 愈創木(mu)酚, 0.1mL 酶(mei)(mei)(mei)(mei)提取(qu)液(ye), 0.2mLH?O?(5mmol/L)。以蒸餾水(shui)(shui)為(wei)參比, 在反應(ying)進(jin)(jin)行到15s時測定(ding)混合液(ye)在470nm波(bo)長(chang)處的吸(xi)光(guang)值(zhi)2min。以每(mei)分鐘(zhong)吸(xi)光(guang)值(zhi)變化(hua)值(zhi)增加1為(wei)一個酶(mei)(mei)(mei)(mei)活性單位(wei)(U)，以U/gFW 表示(shi),重(zhong)復(fu)3次。PPO反應(ying)體系:4mL 乙酸-乙酸鈉(na)緩沖液(ye)(50mmol/L,pH5.5),lmL 鄰(lin)苯(ben)二(er)酚溶(rong)液(ye)(50mmol/L), 0.1mL 酶(mei)(mei)(mei)(mei)提取(qu)液(ye)。以蒸餾水(shui)(shui)為(wei)參比, 在反應(ying)進(jin)(jin)行到15s 時測定(ding)混合液(ye)在420nm波(bo)長(chang)處的吸(xi)光(guang)值(zhi)2min。以每(mei)分鐘(zhong)吸(xi)光(guang)值(zhi)變化(hua)值(zhi)增加1為(wei)一個酶(mei)(mei)(mei)(mei)活性單位(wei) (U), 以U/mg FW表示(shi)。

1.2.6 總(zong)酚、類黃酮和(he)木質素的含量(liang)測定

總酚和(he)類(lei)黃(huang)酮的(de)測(ce)(ce)(ce)定參(can)照Pirie 等的(de)方(fang)法并作修改(gai)。取冷(leng)凍(dong)樣(yang)品(pin)3g，于預冷(leng)的(de)4mL HCL-甲醇溶(rong)(rong)液(ye)中冰(bing)浴研磨成漿，在(zai)(zai)(zai)4℃避光(guang)條件(jian)提取20min，期間搖(yao)動數(shu)次(ci)過濾(lv)收集上層清液(ye)待用(yong)(yong)。以 1%HCL-甲醇溶(rong)(rong)液(ye)做為參(can)比，分(fen)別測(ce)(ce)(ce)定濾(lv)液(ye)在(zai)(zai)(zai)280nm和(he)325nm波長處的(de)吸光(guang)度值作為總酚和(he)類(lei)黃(huang)酮的(de)含(han)量，分(fen)別以OD280·g?1FW 和(he)(  表(biao)示。木質素的(de)含(han)量測(ce)(ce)(ce)定參(can)照Yan等的(de)方(fang)法進行測(ce)(ce)(ce)定。取冷(leng)凍(dong)樣(yang)品(pin)3g，于預冷(leng)5mL95%乙(yi)醇中研磨成漿，在(zai)(zai)(zai)4℃, 14000×g條件(jian)下離(li)心30min, 棄去(qu)上清液(ye), 將(jiang)沉淀物(wu)依次(ci)用(yong)(yong)95%乙(yi)醇, 乙(yi)醇(V):正(zheng)己烷(V)=1：2沖洗3次(ci)，將(jiang)清洗后(hou)的(de)沉淀物(wu)在(zai)(zai)(zai)60℃烘箱中干燥24 h后(hou)轉(zhuan)移至離(li)心管中,溶(rong)(rong)于1mL25%溴(xiu)化乙(yi)酰冰(bing)醋(cu)(cu)酸(suan)溶(rong)(rong)液(ye),70℃恒(heng)溫水(shui)浴30min后(hou)加入1mL NaOH(2mol/L)終止反應(ying)。最后(hou)加入2mL冰(bing)醋(cu)(cu)酸(suan)和(he)0.1mL鹽酸(suan)羥胺(an)(7.5mol/L), 在(zai)(zai)(zai)4℃、12000×g條件(jian)下離(li)心 30 min, 取上清液(ye)0.5mL并用(yong)(yong)冰(bing)醋(cu)(cu)酸(suan)定容至5mL, 在(zai)(zai)(zai)280nm波長處測(ce)(ce)(ce)定吸光(guang)值。

1.3 數據統(tong)計

上(shang)述測定均重(zhong)復3次。全(quan)部數據用(yong)Excel 2010計算平均值和標(biao)準誤(±SE),用(yong)SPSS 19.0進行 Duncan’s 多重(zhong)差異(yi)顯(xian)著性分析及相關性分析 (P<0.05)。

2 結果與分析(xi)

2.1 ClO?處理(li)對愈(yu)傷期間果(guo)實失重率和(he)病情(qing)指數的影響

愈傷(shang)期間，處(chu)理(li)和對照(zhao)(zhao)果(guo)實(shi)的失重(zhong)率均逐(zhu)漸(jian)升高，但處(chu)理(li)果(guo)實(shi)的失重(zhong)率顯著低于對照(zhao)(zhao)，第(di) 7 天時,比對照(zhao)(zhao)低 10.3%(P<0.05)(圖(tu) 1-A)。處(chu)理(li)和對照(zhao)(zhao)果(guo)實(shi)的病(bing)情指數均隨愈傷(shang)時間的延長逐(zhu)漸(jian)下(xia)降，處(chu)理(li)果(guo)實(shi)顯著低于對照(zhao)(zhao)，第(di)7天時，僅相(xiang)當(dang)于對照(zhao)(zhao)的43.1%(P<0.05)

愈傷期間，處理和(he)(he)對(dui)照(zhao)(zhao)果(guo)實(shi)傷口處的(de)SPP 和(he)(he)SPA積(ji)累量均(jun)逐(zhu)漸增加，處理果(guo)實(shi)的(de)積(ji)累量在愈傷的(de)中后(hou)期均(jun)顯(xian)著(zhu)高(gao)于(yu)對(dui)照(zhao)(zhao)(圖2-A，B)。SPP和(he)(he)SPA的(de)積(ji)累差(cha)異分別(bie)始于(yu)第1天和(he)(he)第3天, 第7 天時(shi) SPP 和(he)(he) SPA 的(de)積(ji)累厚度分別(bie)比(bi)對(dui)照(zhao)(zhao)高(gao)25.3%和(he)(he)        

處(chu)理和對照(zhao)(zhao)果實傷口處(chu)的(de)(de)木質(zhi)(zhi)素(su)積累始于愈傷中期。在第7天時，處(chu)理果實木質(zhi)(zhi)素(su)的(de)(de)積累厚度比對照(zhao)(zhao)高 35.5%(P<0.05)(圖(tu) 3-C)。SPP、SPA 和木質(zhi)(zhi)素(su)的(de)(de)積累結(jie)果表明, 有效促進了厚皮甜瓜(gua)果實傷口處(chu)的(de)(de)木栓化。

愈傷(shang)期(qi)間，處理(li)和(he)對(dui)照果實傷(shang)口處的(de)L*值均先上(shang)升(sheng)后下降，在愈傷(shang)的(de)后期(qi)顯(xian)(xian)(xian)著低于對(dui)照, 第5天(tian)和(he)第7天(tian)時(shi),分別比同(tong)期(qi)對(dui)照低6.1%和(he)5.8%(P<0.05)(圖4-A)。處理(li)和(he)對(dui)照果實的(de)a*值差異(yi)不顯(xian)(xian)(xian)著(結果未(wei)顯(xian)(xian)(xian)示)。兩者b*值總體先降后升(sheng)，在愈傷(shang)的(de)前(qian)期(qi)和(he)中期(qi)顯(xian)(xian)(xian)著高于對(dui)照。第3天(tian)時(shi), 比對(dui)照高17.8%(P<0.05)。

處理對傷口處PAL、POD和 PPO活性以及總(zong)酚、類黃酮、木質素含量的影響

愈(yu)(yu)傷(shang)期間，處理(li)和(he)對(dui)照果(guo)(guo)實(shi)傷(shang)口處的(de)(de) PAL 活(huo)性均逐漸升(sheng)(sheng)高(gao)(gao)(gao)，但(dan)處理(li)果(guo)(guo)實(shi)的(de)(de) PAL 活(huo)性顯(xian)(xian)著高(gao)(gao)(gao)于對(dui)照, 第7天時(shi), 比(bi)(bi)對(dui)照高(gao)(gao)(gao)34.3%(P<0.05)(圖(tu)5-A)。對(dui)照果(guo)(guo)實(shi)的(de)(de)POD和(he)PPO 活(huo)性隨愈(yu)(yu)傷(shang)時(shi)間的(de)(de)延長逐漸升(sheng)(sheng)高(gao)(gao)(gao)，而(er)處理(li)果(guo)(guo)實(shi)的(de)(de)活(huo)性則先(xian)略有降(jiang)低后(hou)(hou)顯(xian)(xian)著升(sheng)(sheng)高(gao)(gao)(gao)，在(zai)愈(yu)(yu)傷(shang)的(de)(de)后(hou)(hou)期顯(xian)(xian)著高(gao)(gao)(gao)于對(dui)照,第7天時(shi), POD 和(he) PPO 活(huo)性分別比(bi)(bi)對(dui)照高(gao)(gao)(gao)80.5%和(he)15.7%(P<0.05)(圖(tu) 5-B，C)。處理(li)果(guo)(guo)實(shi)傷(shang)口處的(de)(de)總酚(fen)、類(lei)黃酮和(he)木(mu)質(zhi)素(su)(su)含(han)量(liang)在(zai)愈(yu)(yu)傷(shang)期間均呈先(xian)降(jiang)后(hou)(hou)升(sheng)(sheng)的(de)(de)趨勢,在(zai)愈(yu)(yu)傷(shang)的(de)(de)后(hou)(hou)期顯(xian)(xian)著高(gao)(gao)(gao)于對(dui)照。第7天時(shi),分別比(bi)(bi)對(dui)照高(gao)(gao)(gao)14.7%、16.8%和(he)15.6%(P<0.05)(圖(tu)5-D, E, F)。PAL、POD 和(he) PPO 活(huo)性以及(ji)總酚(fen)、類(lei)黃酮和(he)木(mu)質(zhi)素(su)(su)含(han)量(liang)的(de)(de)增(zeng)加結果(guo)(guo)表明,  激活(huo)了厚皮甜瓜果(guo)(guo)實(shi)傷(shang)口處的(de)(de)苯丙烷(wan)代謝以及(ji)氧化酶活(huo)性。

3 討論

ClO?可通(tong)過增強(qiang)苯丙(bing)烷(wan)(wan)代謝和(he)提(ti)高氧(yang)化(hua)酶活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)來誘導果實的(de)(de)采后(hou)(hou)抗病性(xing)(xing)(xing)。本研究發(fa)現(xian)，ClO?處理可通(tong)過激活(huo)(huo)采后(hou)(hou)厚皮(pi)(pi)甜瓜(gua)果實傷(shang)(shang)口(kou)處的(de)(de)苯丙(bing)烷(wan)(wan)代謝及氧(yang)化(hua)酶活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)，加速(su)軟(ruan)木脂和(he)木質(zhi)素在(zai)傷(shang)(shang)口(kou)處的(de)(de)沉(chen)積(ji)，從(cong)而促進了厚皮(pi)(pi)甜瓜(gua)果實的(de)(de)采后(hou)(hou)愈傷(shang)(shang)。

本研究發現，ClO?處理可顯著提高厚皮甜瓜果實傷口處的PPO活性。處理果實傷口處L*值高于對照，b*值低于對照的結果表明，PPO參與了愈傷組織的形成，處理果實傷口處的L*值在0 d 顯著高于對照可能源于 ClO?的漂白作用(yong)。在(zai)愈(yu)傷中由于(yu)細(xi)胞內膜被破壞，液(ye)泡中的酚類底物會(hui)和PPO發生反應，氧化為(wei)醌，醌再進一步聚合為(wei)黑色或褐色的物質。這些聚合物不僅引起(qi)果(guo)實組織褐變，而(er)且可直接抑制病原菌生長，鈍(dun)化病原菌分泌(mi)的胞外酶，該結果(guo)與 Wei等(deng)人在(zai)獼猴桃愈(yu)傷期間觀察到的結果(guo)一致(zhi)。

4 結論

ClO?采(cai)后處理可有效(xiao)降低損傷果實(shi)的(de)(de)失重率和損傷接種果實(shi)的(de)(de)病(bing)情指數，促(cu)進了(le)厚皮甜(tian)瓜的(de)(de)采(cai)后愈傷。ClO?處理對(dui)采(cai)后厚皮甜(tian)瓜愈傷的(de)(de)促(cu)進作用與激活果實(shi)苯丙烷代謝，提高(gao)POD和PPO活性，促(cu)進SPP、SPA和木質素在傷口處的(de)(de)積累密切相關。